Лента новостей RSSRSS КалькуляторыКалькуляторы Вопросы экспертуВопросы эксперту Перейти в видео разделВидео

МУК 4.2.671-97

Методы санитарно-микробиологического анализа питьевой воды

Заменен на МУК 4.2.1018-01: Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды
Действие завершено 01.07.2001

Документ «Методы санитарно-микробиологического анализа питьевой воды» был заменен.

Скрыть дополнительную информацию

Дата введения: 04.07.1997
Добавлен в базу: 01.09.2013
Заверение срока действия: 01.07.2001
04.07.1997 Утвержден Председатель Госкомсанэпиднадзора России - Главный государственный санитарный врач Российской Федерации
Разработан Московский НИИ гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана Минздрава РСФСР
Разработан Аналитический центр контроля качества воды РОСА
Разработан НИИ коммунального водоснабжения и очистки воды
Разработан НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.М.Сысина РАМН
Издан Информационно-издательский центр Минздрава России
Разработан Федеральный центр государственного санитарно-эпидемиологического надзора
Статус документа на 2016: Неактуальный

Страница 1

Страница 2

Страница 3

Страница 4

Страница 5

Страница 6

Страница 7

Страница 8

Страница 9

Страница 10

Страница 11

Страница 12

Страница 13

Страница 14

Страница 15

Страница 16

Страница 17

Страница 18

Страница 19

Страница 20

Страница 21

Страница 22

Страница 23

Страница 24

Страница 25

Страница 26

Страница 27

Страница 28

Страница 29

Страница 30

Страница 31

Страница 32

Страница 33

Страница 34

Страница 35

Страница 36

Страница 37

Государственная система санитарно-эпидемиологического нормирования Российской Федерации

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Методы санитарно-микробиологического анализа питьевой воды

Методические указания МУК 4.2.671-97

Издание официальное

Минздрав России Москва» 1997

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Методы санитарно-микробиологического анализа питьевой воды

Методические указания МУК 4.2.671-97

ББК 51.21 М54

М54 Методы санитарно-микробиологического анализа питьевой поды: Методические указания.—М.: Информационно-издательский центр Минздрава России, 1997.-36 с.

ISBN 5-7508-0095-4

1.    Разработаны авторским коллективом н составе: Недачин А. В., Артемова Т. 3., Доскина Т. В., Дмитриева Р. А., Тишкова Н. К).. Сидоренко С Г. (НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А. Н. Сысина Российской Академии Медицинских Наук).

При участии Трухиной Г. М (Московский НИИ гигиены им Ф. Ф. Эрисмана Минздрава Российской Федерации); Кашкаро-вой Г. П., Ахапкиной Е. Н. (Аналитический центр контроля качества воды «Роса*); Кривопаловой Н. С., Воронцовой Г. В., Сорокиной Р. С. (Федеральный центр Государственного санитарно-эпидемиологического надзора), Русановой Н А. (НИИ коммунального водоснабжения и очистки воды).

2.    Утверждены и введены в действие Председателем Госкомса-нэпиднадзора России - Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 4 июля 1997 года

3.    Введены впервые к СанПиН 2.1.4.559—96 «Питьевая вода Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества».

ББК 51.21

ISBN 5-7508-0095-4

© И нформацион но - издательски й центр Минздрава России

Содержание

МУК 4.2.671—97

1.    Область применения.....................................4

2.    Нормативные ссылки....................................5

3.    Отбор, хранение и транспортирование проб.....................5

4.    Оборудование, расходные материалы, реактивы, питательные среды ... 7

5.    Приготовление питательных сред и реактивов....................10

6.    Подготовка к анализу....................................15

7.    Методика работы при использовании мембранных фильтров..........16

8.    Проведение анализа.....................................17

8.1.    Определение общего числа микроорганизмов, образующих

колонии на питательном агаре................................17

8.2.    Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий

методом мембранной фильтрации.............................19

8.3.    Определение общих и термоталерантных колиформных бактерий

титрационным методом ...................................23

8.4.    Определение споровых сульфитредуцирующих клостридий

методом мембранной фильтрации.............................26

8.5.    Определение споровых сульфитредуцирующих клостридий

прямым методом.........................................28

8.6.    Определение колифагов прямым методом....................29

8.7.    Определение колифагов титрационным методом................30

Приложение............................................32

3

МУК 4.2.671—97

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации Г. Г. Онищенко

4 июля 1997 г.

МУК 4.2.671-97

Дата введения: с момента утверждения

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Методы санитарно-микробиологического анализа питьевой воды
Методические указания МУК 4.2.671-97

1. Область применения

Методические указания устанавливают методы микробиологического анализа питьевой воды по нормируемым показателям СанПиН 2.1.4.559—96 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества*. Настоящие методические указания являются обязательными для контроля качества питьевой воды в отношении ее эпидемической безопасности при проведении государственного и производственного контроля, а также сертификационных испытаний, и распростаняются на все лаборатории, выполняющие эти исследования, вне зависимости от подчиненности и форм собственности.

Издание официальное Настоящие методические указания нс

могут быть полностью или частично воспроизведены, тиражированы и распространены без разрешения Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России.

МУК 4.2.671—97

2. Нормативные ссылки

В настоящих методических указаниях использованы ссылки на следующие документы:

2.1.    СанПиН 2.1.4.559—96 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества».

2.2.    ИСО 9308-1: 1990. Качество воды. Обнаружение и подсчет колиформных организмов, термотолерантных колифор-мных организмов и предполагаемых Е. сой.—часть 1: Метод мембранной фильтрации.

2.3.    Обнаружение и подсчет колиформных организмов, термотолерантных колиформных организмов и предполагаемых Е. сой—Часть 2: Титрационный метод (определение наиболее вероятного числа).

2.4.    ИСО 6222-1988. Качество воды. Проведение анализа на наличие жизнеспособных микроорганизмов.

2.5.    ИСО 6461-2: 1986. Качество воды. Обнаружение и подсчет спор сульфитредуцирующих анаэробов (клостридий).— Часть 2: Метод мембранной фильтрации.

2.6.    Методические указания по санитарно-микробиологическому анализу воды поверхностных водоемов. Москва, 1981, № 2285-81.

2.7.    ГОСТ 18963-73. Вода питьевая. Методы санитарнобактериологического анализа.

2.8.    Руководство по контролю качества питьевой воды. ВОЗ. Женева 1994. Часть 1.

3. Отбор, хранение и транспортирование проб

3.1 Общие требования к отбору проб

Для отбора проб воды используют специально предназначенную для этих целей одноразовую посуду или емкости многократного применения, изготовленные из материалов, не влияющих на жизнедеятельность микроорганизмов.

Емкости должны быть оснащены плотно закрывающимися пробками (силиконовыми, резиновыми или из других материалов) и защитным колпачком (из алюминиевой фольги, плотной бумаги).

Многоразовая посуда, в том числе пробки, должна выдерживать стерилизацию сухим жаром или автоклавированием.

Пробу отбирают в стерильные емкости с соблюдением правил стерильности. Емкость открывают непосредственно

5

перед отбором, удаляя пробку вместе со стерильным колпачком. Во время отбора пробка и края емкости нс должны чего-либо касаться. Ополаскивать посуду запрещается.

При исследовании воды из распределительных сетей отбор проб из крана производят после предварительной его стерилизации обжиганием и последующего спуска воды не менее 10 минут при полностью открытом кране. При отборе пробы напор воды может быть уменьшен. Пробу отбирают непосредственно из крана без резиновых шлангов, водораспределительных сеток и других насадок.

Если через пробоотборный кран происходит постоянный излив воды, отбор проб производят без предварительного обжига, нс изменяя напора воды и существующей конструкции (при наличии силиконовых или резиновых шлангов).

Если отбирают воду после обеззараживания химическими реаге1гтами, то для нейтрализации остаточного количества дезинфектанта в емкость, предназначенную для отбора проб, вносят до стерилизации натрий серноватистокислый в виде кристаллов или концентрированного раствора из расчета 10 мг на 500 мл воды.

После наполнения емкость закрывают стерильной пробкой и колпачком.

При заполнении емкостей должно оставаться пространство между пробкой и поверхностью воды, чтобы пробка не смачивалась при транспортировании.

При отборе проб в одной и той же точке для различных целей, первыми отбирают пробы для бактериологических исследований.

Отобранную пробу маркируют и сопровождают актом отбора проб воды с указанием места, даты, времени забора и другой информации.

32 Хранение и транспортирование проб

К исследованию проб в лаборатории необходимо приступить как можно быстрее с момента отбора.

Доставка проб осуществляется в контейнерах-холодильниках при температуре +4—+ 10 °С. В холодный период года контейнеры должны быть снабжены термоизолирующими прокладками, обеспечивающими предохранение проб от промерзания. При соблюдении указанных условий срок начала исследований от момента отбора проб нс должен превышать 6 часов.

Если пробы нельзя охладить, их анализ следует провести в течение 2-х часов после забора.

6

МУК 4.2.671—97

Если не может быть соблюдено время доставки пробы и температура хранения, анализ пробы проводить не следует.

Пробы питьевой воды должны доставляться в отдельных продезинфицированных контейнерах.

4. Оборудование, расходные материалы, реактивы, питательные среды

4.1. Основное оборудование

Термостат, способный поддерживать рабочую температуру 37 °С и обеспечивать градиент температуры в камере ±1 °С Термостат, способный поддерживать рабочую температуру 44 °С и обеспечивать градиент температуры в камере ±1 °С Термостат или водяная баня, способные поддерживать рабочую температуру в камере 44 °С с градиентом температуры в камере ±0,5 °С

Водяная баня, обеспечивающая поддержание рабочего температурного режима 75 °С с 1радиентом температуры ±5 °С Водяная баня или термостат, способные поддерживать температуру 45—50 °С (для питательных сред)

Прибор для мембраной фильтрации под вакуумом с диаметром фильтрующей поверхности 35 или 47 мм; вакуумный насос для создания разрежения 0,5—1,0 атм.; прибор вакуумного фильтрования ПВФ-35 и вакуумный насос СП-4-044 отечественного производства

Весы лабораторные общего назначения 4-го класса точности, наибольший предел взвешивания 200 г, допускается погрешность не более 0,02 г

Весы лабораторные общего назначения 4-го класса точности, наибольший предел взвешивания 1 кг, допускается погрешность не более 0,1 г

PH-метр, обеспечивающий измерение с погрешностью до 0,01 Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды не ниже ГОСТа 6709—72 Лупа измерительная 2х

Шкаф сушильный, стерилизационный, обеспечивающий температуру +180 °С

Стерилизатор паровой с режимами стерилизации от температуры +100 °С (текучим паром) до +126 °С (под давлением) Холодильник бытовой

Вытяжной шкаф для работы с хлороформом при проведении анализа на колифаги

7

Магнитные мешалки с подогревом до 300 °С для варки сред, либо другой нагревательный прибор Дозаторы для разлива питательных сред Дозаторы нипеточные для использования в анализе. Примечание: к применению допускается только измерительное оборудование, вошедшее в Государственный реестр.

42 Мелкое оборудование и расходные материалы

Мембранные фильтры нитрат или ацетат целлюлозные для микробиологических целей с диаметром пор 0,45 мкм и размером 35 или 47 мм: отечественные фильтрующие мембраны Владипор МФАС-ОС-1, МФАС-ОС-2, МФА-МА (номер 4—6); или аналогичные мембраны зарубежного производства, имеющие международный сертификат качества ISO 9000 или EN 29 000 Горелки газовые или спиртовки

Индикаторы бумажные для определения pH в диапазоне 6—8 с интервалом определения 0,2 Петли бактериологические

Пинцеты для работы с мебранными фильтрами Штативы для пробирок

Фольга алюминиевая, колпачки силиконовые, металлические Лабораторная посуда стеклянная либо одноразового использования (колбы, цилиндры, пипетки, флаконы, стаканы, чашки Петри, пробирки, стеклянные палочки, поплавки, емкости для отбора проб) Пробки различных размеров: силиконовые, резиновые и другие, выдерживающие стерилизацию сухим жаром или автоклавированием

Бумага фильтровальная Вата хлопковая

Карандаши или фломастеры по стеклу Лейкопластырь

Марля медицинская в кусках или бинты Перчатки резиновые

43. Химические реактивы

Все химические реактивы должны соогветсвовать квалификации не ниже ч. д. а.

Железо сернокислое закисное    ГОСТ    4148—78

Бромтимоловый синий

Кислота соляная    ГОСТ    3118—77

Натрий серноватистокислый    ГОСТ    4215—66

8

МУК 4.2.671-97

Натрий хлористый Натрий гидрат окиси Спирт этиловый ректификованный 96 %-ный, медицинский Спирт этиловый технический для обработки столов, термостатов, холодильников и другого инвентаря Глюкоза Лактоза Маннит

Натрий сернистокислый (сульфит натрия) а-нафтол

Роэоловая кислота

ГОСТ 4233-77 ГОСТ4328—77

ГОСТ 5962-67

ГОСТ 18300-87 ГОСТ 603&—79 ГОСТ 6038-74 ГОСТ 8321-74 ГОСТ 903-76 ГОСТ 5838-79

Фенилендиаминовые соединения* (тетраметил - я- фенилендиамин гидрохлорид, диметил-п-фенилендиамин солянокис-лыЙ, диметил-п-фенилендиамин, дифенил-п-фенилендиа-мин и другие)

Фуксин основной’    ТУ 6—09—4119—75

Хлороформ технический*    ГОСТ 20015-76

Примечание: ’вещества обладают канцерогенным и мутагенным действием, работать с соблюдением мер предосторожности.

4.4 Питательные среды промышленного производства Агар Эндо сухой

Агар микробиологический    ГОСТ    17206—77

Агар сухой питательный

Сухой препарат с индикатором ВР и лактозой

Сухой препарат с индикатором ВР и маннитом

Сухой препарат с индикатором ВР и глюкозой

Сухой питательный бульон

Пептон сухой ферментативный для

бактериологических целей    ГОСТ    13805—76

Системы индикаторные бумажные (СИБ):

•    СИБ-лакгоза;

•    СИБ-маннит;

•    СИБ-оксидаза;

•    СИБ-глюкоза.

Допускаются к использованию коммерческие питательные среды, диагностические препараты и системы идентификации производства зарубежных фирм, предназначенные для целей описываемых методов. Питательные среды и биологические

9

МУК 4.2.671—97

препараты зарубежного производства должны иметь международный сертификат качества ISO 9000 или EN 29 ООО.

При использовании следует руководствоваться рекомендациями фирмы-производителя.

Все обезвоженные коммерческие питательные среды и препараты отечественного производства должны иметь сертификат соответствия, паспорт и инструкцию по применению.

4.5. Тест-культуры микроорганизмов

Штамм Е. coli К12 F+

Pseudomonas aeruginosa или Pseudomonas fluorcscens

Контрольные штаммы получают в Российском Государственном институте медицинских и биологических препаратов им. Л. А. Тарасевича или Областном Центре госсанэпиднадзора.

5. Приготовление питательных сред и реактивов

5.1 Общие положения

Предпочтительно использование стандартизованных сухих питательных сред промышленного производства.

При использовании промышленных сухих питательных сред их приготавливают в соответствии с указаниями изготовителя на этикетке. В этом случае следует соблюдать способ применения и срок хранения питательных сред, указанных на упаковках.

Сухие питательные среды хранят в сухих помещениях, в темноте, при комнатной температуре. Открытые упаковки тщательно закупоривают. Среды с измененным внешним видом (уплотненные, с комками), а также с истекшим сроком годности не используют.

Для приготовления растворов, реактивов и питательных сред применяют воду дистиллированную но ГОСТу 6709—72.

Питательные среды приготовляют в посуде из инертного материала.

Учитывая возможное изменение pH питательных сред после кипячения и стерилизации при приготовлении сред устанавливают pH на 0,2—0,3 выше заданного, что определяют опытным путем для каждой среды. Окончательный контроль pH проводят в готовой среде при температуре 25 °С с использованием pH-метра (жидкие среды) или бумажных индикаторов (агаризованные среды).

10

МУК 4.2.671—97

После стерилизации питательные среды оставляют для охлаждения при комнатной температуре.

Температура сред, хранящихся в холодильнике, перед посевом должна быть доведена до комнатной.

При необходимости разлить готовую питательную среду в чашки Петри, ее следует охладить до температуры 50—60 °С.

Готовые полужидкие питательные среды хранят при комнатной температуре.

52 Мясная вода

500 г мясного фарша без жира и сухожилий заливают 1 л дистилированной воды, настаивают 12 часов на холоде или 1 час в водяной бане при 50—60 °С. Затем настой кипятят, фильтруют через марлю или вату и опять доводят дистилированной водой до 1 л, разливают во флаконы, стерилизуют при (120 ±2) °С (105 ПА) 20 мин и приступают непосредственно к приготовлению мясо-пептонного бульона или других питательных сред.

53 Питательный бульон

5.3.1. Мясо-пептонный бульон (МПБ)

К 1 л мясной воды прибавляют 10 г пептона и 5 г натрия хлористого, нагревают до полного растворения пептона и соли, устанавливают pH (7,2—7,4), осветляют, фильтруют и разливают в пробирки или во флаконы в количествах, необходимых для анализа, закрывают ватными пробками и стерилизуют при (120±2) °С (105 ПА) 20 мин.

5.3.2. Питательный бульон из заменителей мяса (ПБ)

Готовят из заменителей мяса (мясного экстракта, рыбного гидролизата или других) по способу, указанному на этикетке.

Для приготовления десятикратного питательного бульона количество пептона и хлористого натрия (п. 5.3.1) или сухого препарата (п. 5.3.2) увеличивают в 10 раз.

5.4 Питательный агар

5.4.1. Питательный агар промышленного производства

Готовят из сухого препарата по способу, указанному на этикетке.

11

МУК 4.2.671-97

5.4.2. Мясо-пептонный агар (МПА)

1,5 % МПА - к 1 л мясо-пептонного бульона прибавляют 15 г агара в волокнах или порошке, нагревают до полного растворения, корректируют pH (7,2—7,4), осветляют, фильтруют в горячем виде через ватно-марлевый фильтр и разливают во флаконы или пробирки в количествах, необходимых для анализа. Стерилизуют при (120 ±2) °С (105 ПА) 20 минут.

2 % МПА готовят, увеличивая концентрацию агара до 20 г на тот же объем МП Б.

5.4.3. Питательный агар на основе (ПБ) из заменителей мяса

Готовят по п. 5.4.2, заменяя мясо-пептонный бульон на питательный бульон из заменителей мяса.

2 %-ный питательный агар готовят, увеличивая навеску сухого препарата на 1/4 от прописи.

55 Фуксин - сульфитная среда Эндо

5.5.1. Основная модификация

Готовят из сухого препарата по способу, указанному на этикетке.

Для повышения дифференцирующих свойств среды в готовую и охлажденную до 60—70 °С среду перед разливкой в чашки допускается прибавлять на 100 мл среды 0,2 мл 5 %-ного спиртового раствора основного фуксина.

Если на поверхности среды заметны следы влаги, чашки перед посевом необходимо подсушить. Срок хранения чашек со средой не более 2—3 суток в темноте, раствора фуксина - нс более 1-го месяца.

5.5.2. Модификация среды с добавлением розоловой кислоты

При исследовании питьевой обеззараженной воды с преобладанием микрофлоры, не относящейся к бактериям кишечной группы, помимо фуксина, допускается добавление на 100 мл среды Эндо 0,2 мл 5 %-го спиртового раствора розоловой кислоты. Срок хранения розоловой кислоты - нс более 1-го месяца

5 6 Лактозо-пеггтонная (глюкозо-пептонная) среда

10 г пептона, 5 г натрия хлористого, 5 г лактозы (глюкозы) растворяют при нагревании в 1 л дистиллированной воды. После растворения ингредиентов устанавливают. pH (7,4—7,6),

12

МУК 4.2.671—97

разливают по 10 мл в пробирки, стерилизуют при (112±2) °С (5,104 ПА) 12 минут.

Для приговления концентрированной лакгозо-пентонной (глюкозо-пептонной) среды все ингредиенты, кроме воды, увеличивают в 10 раз, разливают по 1 мл в пробирки и по 10 мл во флаконы.

57 Питательные среды для подтверждения способности ферментировать лактозу или маннит (глюкозу) до кислоты и газа

5.7.1.    Полужидкая среда с лактозой или маннитом (глюкозой) Готовят из сухого препарата по способу, указанному на

этикетке. Срок хранения - не более 2-х недель.

5.7.2.    Полужидкая среда с лактозой или маннитом (глюкозой) Готовят при отсутствии сухого препарата.

В 1 л дистиллированной воды растворяют 10 г пептона, 5 г натрия хлористого, 4—5 г агар-агара, доводит до кипения, устанавливают pH (7,2—7,4), добавляют 1 мл 1,6 % спиртового раствора бромтимолового синего. Стерилизуют при (120 ±2) °С (105 ПА) 20 мин. В расплавленную среду вносят 5 г лактозы или маннита (глюкозы), нагревают до кипения, разливают в стерильные ки на высоту 3—5 см и стерилизуют при (112 ±2) °С ПА) 12 мин. Срок хранения - не более 2-х недель. Правильно приготовленная среда - зеленого цвета с синеватым оттенком (цвет бутылочного стекла). Посев производят уколом до дна пробирки. При образовании кислоты цвет среды изменяется в желтый, при газообразовании газ скапливается или по уколу, или на поверхности, или в толще среды появляются разрывы. При инкубации посевов более 5 часов газ может улетучиться. В таких случаях на присутствие газа указывают оставшиеся в толще среды «карманы» - потемнения среды на месте бывшего пузырька газа.

5.7.3. Лактоэо-пептонная среда по п. 5.6 При использовании в качестве подтверждающей следует добавить 2 мл 1,6 %-ного неспиртового раствора индикатора бромтимолового синего на 1000 мл среды.

пробир (5,КГ

13

Глюкозу используют при отсутствии маннита.

МУК 4.2.671—97

Разливают по 4—5 мл в пробирки с поплавками или комочками ваты.

5.7.4. СИБ-лактоза или СИБ-ыаннит (глюкоза)

Готовят по прописи завода-изготовителя.

58 Реактивы для оксидазного теста

1    вариант - 1 %-ный водный раствор тетраметил-п-фенилендиамииа гидрохлорида.

2    вариант - 1 %-ный реактив - 1 %-ный спиртовой раствор а-нафтола, 2-ой реактив - 1 %-ный водный раствор фенилен-диаминового соединения.

Растворы сохраняют в темных флаконах с притертыми пробками: 1-ый - до одного месяца, 2-ой - до одной недели. Перед употреблением (при работе со 2 вариантом) к трем частям первого раствора добавляют семь частей второго раствора.

Вместо реактива можно использовать системы индикаторные бумажные (СИБ-оксидаза) или бумажки, приготовленные заранее.

Приготовление бумажек для оксидазного теста: 30 мг а-нафтола растворить в 2,5 мл 96 %-ного этилового спирта, добавить 7,5 мл дистиллированной воды и затем 50 мг диэтиланилинсульфата. Смочить фильтровальную бумажку, высушить и хранить в темноте в черной бумаге не более 6 месяцев.

С каждой новой партией реактивов, а также периодически в процессе хранения реактивов или готовой бумажной системы следует проводить контрольные испытания с тест-культурам и известных микроорганизмов, дающих положительную реакцию (Pseudomonas aeruginosa или Pseudomonas fluorescens) и отрицательную реакцию (Е. coli).

5.9 Железо-супьфитный агар

Основная среда. В 1000 мл стерильного расплавленного питательного агара (по п. 5.4) добавляют 10 г глюкозы, нагревают до растворения, разливают мерно во флаконы, автоклавируют при (112±2) °С 12 минут.

20 %-ный раствор сульфита натрия (ЫагБОз) и 8 %-ный раствор железа сернокислого закисиого (FC2SO4) готовят непосредственно перед употреблением в стерильной посуде на стерильной дистиллированной воде. Раствор сульфита натрия

14

МУК 4.2.671—97

нагревают до полного растворения. Перед выполнением анализа в 100 мл расплавленной основной среды вносят 5 мл 20 %-ного раствора сульфита натрия, перемешивают, затем вносят 1 мл 8 %-ного раствора сернокислого железа, перемешивают и разливают с соблюдением правил стерильности в стерильные пробирки высоким столбиком (12—15 см) - для работы методом мембранной фильтрации, или во флаконы - для работы методом прямого посева.

6. Подготовка к анализу

6.1. Подготовка посуды и материалов

Лабораторная посуда должна быть тщательно вымыта, ополоснута дистиллированной водой до полного удаления моющих средств и других посторонних примесей и высушена.

Пробирки, колбы, бутылки, флаконы должны быть заткнуты силиконовыми или ватно-марлевыми пробками и упакованы так, чтобы исключить загрязнения после стерилизации в процессе работы и хранения. Колпачки могут быть металлические, силиконовые, из фольги или плотной бумаги.

Флаконы для отбора проб закрывают силиконовыми, резиновыми и другими пробками, исключая ватно-марлевые, а также колпачками, изготовленными из фольги, плотной бумаги и др.

Новые резиновые пробки кипятят в 2 %-ном растворе натрия двууглекислого 30 мин и 5 раз промывают водопроводной водой (кипячение и промывание повторяют дважды). Затем пробки кипятят в дистиллированной воде 30 мин, высушивают, заворачивают в бумагу или фольгу и стерилизуют в паровом стерилизаторе. Резиновые пробки, использованные ранее, обеззараживают, кипятят 30 минут в водопроводной воде с нейтральным моющим средством, промывают в водопроводной воде, высушивают, монтируют и стерилизуют.

При приготовлении емкостей для отбора проб с притертой пробкой, между стенкой горлышка и пробкой следует вложить полоску тонкой бумаги.

Пипетки со вставленными тампонами из ваты должны быть уложены в металлические пеналы или завернуты в бумагу.

Чашки бактериологические в закрытом состоянии должны быть уложены в металлические пеналы или завернуты в бумагу. Бумага, используемая для обертывания лабораторной посуды, нс должна разрушаться при стерилизации.

15

МУК 4.2.671—97

Подготовленную посуду стерилизуют в сушильном шкафу при 160—170 °С 1 час, считая с момента достижения указанной температуры. Простерилизованную посуду можно вынимать из сушильного шкафа только после его охлаждения ниже 60 °С.

Материалы и лабораторная посуда, имеющие элементы материалов, разрушающихся при температуре 160 °С (резина и т. п.), следует стерилизовать в паровом стерилизаторе при температуре (121 ±2) °С (105 ПА) 20 мин.

После выполнения анализа все использованные чашки и пробирки обеззараживают в автоклаве при (126±2) °С 60 мин. Пипетки обеззараживают кипячением в 2 %-ном растворе ЫаНСОз.

После охлаждения удаляют остатки сред, затем чашки и пробирки замачивают, кипятят в водопроводной воде и моют с последующим ополаскиванием дистиллированной водой.

62 Подготовка проб воды

Прежде чем приступить к посеву, пробу необходимо тщательно перемешать и обработать горящим тампоном край емкости с тем, чтобы устранить его возможное загрязнение во время транспортирования. На используемых для посева пробирках и чашках необходимо обозначить номер пробы, объем воды или разбавление, дату посева.

Перед каждым отбором новой порции воды для анализа пробу необходимо перемешать стерильной пипеткой.

7. Методика работы при использовании мембранных фильтров

7.1. Подготовка мембранных фильтров

Мембранные фильтры должны быть подготовлены к анализу в соответствии с указаниями завода-изготовителя.

72 Подготовка фильтровального аппарата

Фильтровальный аппарат обтирают ватным тампоном, смоченным спиртом ректификованным, и фламбируют. После охлаждения на нижнюю часть фильтровального аппарата (столик) кладут фламбированным пинцетом стерильный мембранный фильтр, ирижимают его верхней частью прибора (стаканом, воронкой) и закрепляют устройством, предусмотренным конструкцией прибора.

16

73 Фильтрование воды

МУК 4.2.671—97

В верхнюю часть прибора для фильтрования наливают точно отмеренный объем воды, затем создают вакуум в нижней части прибора.

При посеве нескольких объемов одной пробы следует фильтровать через один фильтровальный аппарат сначала меньшие, а затем большие объемы воды, меняя каждый раз фильтры.

При фильтровании 1 мл исследуемой воды или ее разбавления следует в воронку налить предварительно не менее 10 мл стерильной водопроводной воды, а затем внести анализируемую воду.

После окончания фильтрования воронку снимают, фильтр осторожно приподнимают за край фламбированным пинцетом при сохранении вакуума для удаления излишка воды на нижней стороне фильтра, а затем переносят его, не переворачивая, на питательную среду, разлитую в чашки Петри, избегая пузырьков воздуха между средой и фильтром. Поверхность фильтра с оседавшими на ней бактериями должна быть обращена вверх. Вакуум отключают до внесения следующей порции анализируемой воды.

Под каждым фильтром на дне чашки делают надпись с указанием объема профильтрованной воды, даты посева и номера пробы. На одну чашку можно поместить 3—4 фильтра с условием, чтобы фильтры не соприкасались.

Если исследуемая вода содержит большое количество взвешенных веществ, то ее фильтруют сначала через предварительный мембранный фильтр для удаления крупной взвеси, который помещают в фильтровальный прибор, накладывая на фильтр для бактериологического анализа. После окончания фильтрования фильтры переносят на плотную питательную среду раздельно и при выведении результатов анализа учитывают колонии, выросшие на обоих фильтрах.

8. Проведение анализа

8.1 Определение общего числа микроорганизмов, образующих колонии на питательном агаре

8.1.1. Определение понятия показателя

Метод определяет в питьевой воде общее число ме-зофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (ОМЧ), способных образовывать колонии на питательном агаре при температуре 37 °С в течение 24 часов, видимые с увеличением в 2 раза.

17

МУК 4.2.671—97

8. 1.2. Выполнение анализа Из каждой пробы должен быть сделан посев не менее двух объемов по 1 мл.

После тщательного перемешивания пробы воды вносят по 1 мл в стерильные чашки Петри, слегка приоткрывая крышки. Сразу же после внесения воды в каждую чашку вливают 6—8 мл (на чашку диаметром 90—100 мм) расплавленного и остуженного до 45—46 °С питательного агара после фламбирования края посуды, в которой он содержится. Затем быстро смешивают содержимое чашек, равномерно распределяя по всему дну, избегая образования пузырьков воздуха, попадания агара на края и крышку чашки. Эту процедуру производят на горизонтальной поверхности, где чашки оставляют до застывания агара.

Расплавленный агар на период проведения анализа помещают в водяную баню или термостат, поддерживающие температуру 45—46 °С.

Тонкий слой агара увеличивает эффективность учета сапрофитной микрофлоры за счет лучших условий для роста аэробных бактерий, преобладающих в воде. Колонии вырастают более крупными, легко подсчитываемыми на фоне прозрачного тонкого слоя агара. Ограничен рост расплывчатых колоний.

После застывания агара чашки с посевами помещают в термостат вверх дном и инкубируют при температуре (37±1) °С в течение 24±2 часов.

8.1.3. Вычисление и представление результатов Должны быть подсчитаны все выросшие на чашке колонии, наблюдаемые при увеличении в 2 раза. Подсчет следует производить только на тех чашках, на которых выросло не более 300 изолированных колоний.

Подсчитанное количество колоний на каждой чашке суммируют и делят на два. Результат выражают числом колоний образующих единиц (КОЕ) в 1 мл исследуемой пробы воды и заносят в протокол.

Результат дают на основании подсчета колоний на одной чашке, если на другой подсчет невозможен.

Если на всех чашках имеет место рост расплывчатых колоний, не распространяющийся на всю поверхность чашки, или выросло более 300 колоний и анализ нельзя повторить, подсчитывают сектор чашки с последующим пересчетом на всю поверхность. В этих случаях в протоколе отмечают «число КОЕ в 1 мл - ориентировочно».

18

МУК 4.2.671—97

Если подсчет колоний на чашках невозможен, то в протоколе отмечают: «сливной рост*.

На качество результата метода влияет соблюдение деталей техники анализа (срока хранения пробы, температуры и времени инкубации посевов, правил учета результатов, качество питательного агара).

82. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий методом мембранной фильтрации

8.2.1. Определение понятия показателя К общим колиформным бактериям относятся грамотринательные не образующие спор палочки, не обладающие оксидаз-ной активностью, ферментирующие лактозу или маннит с образованием альдегида, кислоты и газа при температуре 37 °С в течение 24-х часов.

Термотолерантные колиформные бактерии обладают всеми признаками общих колиформных бактерий, которые кроме тот способны ферментировать лактозу до кислоты и газа при температуре 44 °С в течение 24-х часов.

в. 2.2. Принцип метода Метод основан на фильтрации установленного объема воды через мембранные фильтры, выращивании посевов на селективной питательной среде с лактозой и последующей идентификации колоний по культуральным и биохимическим свойствам.

8.2.3. Выполнение анализа При исследовании воды на выходе с водопроводных сооружений и в распределительной сети необходимо анализировать 3 объема по 100 мл.

Если анализируемая вода стабильно соответствует нормативам, то допустима фильтрация 300 мл воды через один фильтр.

При необходимости возможно увеличение количества фильтруемых объемов для получения изолированных колоний на фильтре (например, из водопроводной сети можно фильтровать 10, 40, 100, 150 мл воды).

Необходимый точно отмеренный объем воды фильтруют через мембранные фильтры с соблюдением требований, изложенных в п. 7.

Фильтры помещают на среду Эндо, приготовленную по н. 5.5.1 или п. 5.5.2. Чашки с фильтрами ставят в термостат

19

Сохраните страницу в соцсетях:
Другие документы раздела "Прочие"
РАЗДЕЛЫ САЙТА

НОРМАТИВНЫЕ
ДОКУМЕНТЫ

ПРИСОЕДИНЯЙТЕСЬ