Лента новостей RSSRSS КалькуляторыКалькуляторы Вопросы экспертуВопросы эксперту Перейти в видео разделВидео

ГОСТ 25011-81

Мясо и мясные продукты. Методы определения белка

Предлагаем прочесть документ: Мясо и мясные продукты. Методы определения белка. Если у Вас есть информация, что документ «ГОСТ 25011-81» не является актуальным, просим написать об этом в редакцию сайта.

Скрыть дополнительную информацию

Дата введения: 01.01.1983
27.11.1981 Утвержден Госстандарт СССР
Издан Стандартинформ
Издан ИПК Издательство стандартов
Издан Издательство стандартов
Издан Издательство стандартов
Статус документа на 2016: Актуальный

ГОСТ 25011-81

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКА

Издание официальное

Москва ■ЖуУ11 Стандарти нформ

ISJ 2010

УДК 637.S2:006.354    Группа    1119

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ Методы определения белка

ГОСТ

25011-81

Meat and meat products. Methods of protein determination

MKC 67.120.10 ОКСТУ 9209

Постановлением Государственного комитета СССР но стандартам от 27 ноября 1981 г. № 5145 дата введения установлена

01.01.83

Ограничение срока действия снято по протоколу N? 3—93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологам и сертификации (ИУС 5-6—93)

Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные продукты, а также консервы на мясной основе для детского питания и устанавливает фотометрический метод определения белка и метод определения содержания белков по Кьельдалю.

Настоящий стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 2787—S0.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

1. ФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД

1.1.    Сущность метода

Метод основан на минерализации пробы по Кьельдалю и фотометрическом измерении интенсивности окраски индофенолового синего, которая пропорциональна количеству аммиака в минерал нзате.

1.2.    Методы отбора и подготовки проб

1.2.1.    Отбор проб мяса — по ГОСТ 7269-79. отбор проб мясных продуктов — по ГОСТ 9792-73*. Отобранные пробы мяса и мясных продуктов дважды измельчают на бытовой или электрической мясорубке с отверстиями решетки диаметром 3 мм и тщательно перемешивают.

Отбор и подготовка проб коисервов на мясной основе для детского питания — по ГОСТ 8756.0-70.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

1.2.2.    Подготовленную для анализа пробу помещают в стеклянную банку вместимостью 200-400 см3, заполнив се полностью, и закрывают крышкой.

Пробу хранят при температуре от 3 до 5 "С до окончания анализа.

1.3. Аппаратура, реактивы и материалы

Весы лабораторные общего назначения 1-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104-88**.

Спектрофотометр марок СФ-4, СФ-26 или фотоэлектроколорнметр марки 56 П М или других аналогичных марок.

Мясорубка бытовая с отверстиями решетки диаметром не более 4 мм по ГОСТ 4025-95 или электромясорубка бытовая по ГОСТ 20469-95.

* На территории Российской Федерации дополнительно действует ГОСТ Р 51447-99.

** С I июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001 ( ддссь и далее).

Издание официальное    Перепечатка    воспрсшсна

Издание (январь 20Юг.) с Изменением Л?' /, утверж<кнным в декабре 1987г. (ИУС 4—Щ.

© Издательство стандартов, 1981 <& СТАНДАРТИНФОРМ. 2010

60

ГОСТ 25011-81 С. 2

Промывалка стеклянная лабораторная.

Штатив химический.

Пробирки II 4-15-14/23 ХС или 11 4-20-14/23 ХС по ГОСТ 25336-82.

Колбы Кьельдаля 1-50-14/23 ТС или 1-100-14/23 ТС, 2-50-14 ТХС или 2-100-14 ТХС по ГОСТ 25336-82.

Колбы Кн-1-100-14/23 ТС по ГОСТ 25336-82.

Пипетки 4—1 — 1 или 4—2—1, 4—1—5 или 4—2—5.

Колбы мерные 2-100-2, 2-250-2 по ГОСТ 1770-74.

Воронки В-56-80 ХС или В-75-110 ХС по ГОСТ 25336-82.

Стаканы В-1-600 ТС по ГОСТ 25336-82.

Стаканчики для взвешивания СВ-14/8 по ГОСТ 25336-82.

Бумага универсальная индикаторная.

Фильтры обезболенные.

Кислота серная по ГОСТ 4204-77, х. ч., плотностью 1,84 г/см'.

Кислота соляная по ГОСТ 3118-77, х. ч., раствор с (НО) = I моль/дм5.

Водорода перекись по ГОСТ 10929-76.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.

Аммоний сернокислый по ГОСТ 3769-78. х. ч.

Известь хлорная по ГОСТ 1692-85.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77, ч. д. а.

Фенол по ТУ 6-09-5303-86, ч.

Натрий нитропруссидный, ч.

Натрий серноватистокислый (тиосульфат натрия) по ГОСТ 244-76, раствор с (Na2S,0v5H30)= = 0.1 моль/дм'.

Натрия гипохлорит.

Калий йодистый по ГОСТ 4232-74, ч. д. а.

Натрий углекислый безводный по ГОСТ 83-79, ч. д. а.

(Измененная редакция, Изм. К? 1).

1.4. Подготовка к испытанию

1.4.1.    Приготовление реактива 1

10 г фенола и 0,05 г ннтропруссида натрия растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 см3 дистиллированной водой, объем колбы доводят до метхи.

1.4.2.    Приготовление реактива 2

5 г гидроокиси натрия растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1000 см3, после охлаждения добавляют количество исходного раствора гипохлорита натрия из расчета его содержания 0,42 г/дм3 или 0.2 г днхлоризоцианурата натрия и доводят объем колбы дистиллированной подой до метки.

1.4.3.    Приготовленные реактивы хранят в темной посуде в холодильнике не более 2 мес.

1.4.4.    Приготовление исходного гипохлорита натрия

В стакане вместимостью 500 см3 перемешивают 150 г хлорной извести с 250 см3 дистиллированной воды; в другом стакане в 250 см3 дистиллированной воды растворяют 105 г углекислого натрия, затем сливают оба раствора при постоянном перемешивании. Масса сначала густеет, затем разжижается. Полученную суспензию оставляют на 1—2 сут. для отстаивания, затем надосадочную жидкость сливают и отфильтровывают.

Полученный реактив имеет концентрацию активного хлора около 60—100 г/дм3 и может храниться в склянке из темного стекла до 1 года. В потученном реактиве определяют концентрацию активного хлора. Для этого I см3 прозрачного фильтрата разбавляют в конической колбе вместимостью 100 см’ дистиллированной водой до 40—50 см3, прибавляют 2 г калия йодистого и 10 см3 сатяной кислоты 1 моль/дм3 (1 н.). Образовавшийся йод оттитровывают 0,1 мааь/дм' (0,1 н.) раствором серноватистокислого натрия, приготовленного из фиксанала, до исчезновения вишневой окраски (1 см3 0.1 моль/дм3 (0,1 и.) раствора серноватистокнслого натрия соответствует 0,00355 г хлора).

(Измененная редакция, Изм. К? 1).

1.4.5.    Определение количества гипохлорита натрия в исходном растворе

Перед приготовлением реактива 2 необходимо определить содержание гипохлорита натрия в исходном растворе, учитывая неустойчивость его при хранении.

61

С. 3 ГОСТ 25011-81

По количеству израсходованного на титрование тиосульфата натрия определяют количество раствора гнпохлорита натрия, необходимого для приготовления реактива 2.

Пример расчета:

Количество раствора тиосульфата натрия концентрации 0,1 моль/дм5 (0,1 н.), израсходованного на титрование 1 см5 исходного раствора гипохлорита натрия, состаапяет, например. 12.09 см3.

Эквивалентная масса гипохлорита натрия равна половине молекулярной массы гипохлорита натрия и состаатяет 74.4:2 = 37,2 г. Следовательно, количество гипохлорита натрия в исходном растворе гипохлорита натрия составляет 1,209 х 37,2 = 44.97 г.

Учитывая, что реактив 2 должен содержать 0,42 г гнпохлорита натрия, из пропорции определяем:

в 1000 см3 исходного раствора — 44.97 г X    - 0,42 г

Хт 10^42 ж9,4см,

Следовательно, для приготовления 1 дм3 реактива 2 требуется 9,4 см- исходного раствора гнпохлорита натрия.

1.4.6.    Приготовление стандартного раствора сернокислого аммония для построения градуировочной кривой

0.236 г сернокислого аммония, предварительно высушенного до постоянной массы при температуре 60 *С. вносят в мерную колбу вместимостью 500 см3, растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до метки.

Этот раствор является стандартным и содержит 0,1 мг азота в 1 см3.

1.4.7.    Проведение цветной реакции

В мерные колбы вместимостью по 100 см’ вносят следующие количества стандартного раствора в см3: 1.0; 1.5; 2,0; 2,5; 3,0: 3,5: 4.0; 4.5; 5.0. После доведения объемов колб дистиллированной водой до метки получают серию рабочих растворов концентрации: 1,0; 1,5: 2,0; 2,5; 3.0; 3,5; 4,0; 4.5; 5,0 мкг азота в 1 см3.

Для проведения цветной реакции в пробирки берут по 1 см3 рабочего раствора, добаатяют 5 см3 реактива 1 и 5 см3 реактива 2, перемешивают и через 30 мин измеряют величину оптической плотности на спектрофотометре при длине волны 625 нм или на фотоэлектроколориметре с красным светофильтром в кювете с толщиной поглощающего свет слоя I см в отношении контрольного опыта.

Повторность проведения цветной реакции трехкратная. Для каждого определения готовят новый стандартный раствор.

1.4.8.    Построение градуировочного графика

По полученным средним из трех стандартных растворов строят на миллиметровой бумаге размером 20 х 20 см градуировочный график.

На оси абсцисс откладывают величину концентрации азота (мкг/см3), на оси ординат — соответствующую ей оптическую плотность. Градуировочный график должен проходить через начало координат.

1.5. Проведение испытания

Навеску продукта рассчитывают по разности, для этого часть измельченной объединенной пробы помешают в бюксу, закрывают крышкой и взвешивают с допустимой погрешностью не более 0,0002 г. Затем из бюксы скальпелем отбирают 0,4—0,5 г продукта на листок беззольного фильтра и вместе с ним осторожно опускают в колбу Кьельдаля. Бюксу закрывают, взвешивают и рассчитывают точную массу продукта, взятого для анализа.

Такой же листок беззольного фильтра помешают в контрольную колбу Кьельдаля. Затем в обе колбы добавляют 10 см3 концентрированной серной кислоты. 1—2 г сернокислого калия и проводят минерализацию, периодически добавляя для интенсивности процесса в охлажденную пробу перекись водорода (5—7 см3 в течение всей минерализации). Допускается применение других катализаторов. обеспечивающих точность определения.

После минерализации колбы охлаждают и содержимое количественно переносят в мерные колбы вместимостью 250 см3, после охлаждения объем доводят до метки и содержимое перемешивают.

5 см3 полученного минералнзата переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят до метки дистиллированной водой, получая вторично разбавленный мннерализат. Для проведения

62

ГОСТ 25011-81 С. 4

цветной реакции 1 см3 вторично разбавленного минеролизапа вносят п пробирку, затем последовательно добавляют 5 см-’ реактива 1 и 5 см3 реактива 2, перемешивают содержимое пробирки. Через 30 мин определяют оптическую плотность растворов на спектрофотометре при длине волны 625 нм или на фотоэлектроколориметре с применением красного светофильтра. Измерение ведется в сравнении с контрольным раствором.

Контрольный раствор готовят одновременно, используя для этой цели контрольный минера-лизат.

Стабильность окраски растворов сохраняется в течение одного часа.

Температура реактивов при проведении цветной реакции должна быть не ниже 20 *С.

По полученному значению оптической плотности с помощью калибровочного графика находят концентрацию азота.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

1.6. Обработка результатов

Массовую долю белка (А), в процентах, вычисляют по формуле

С- 250- 100

mTTTiF 100 6-25-

где С — концентрация азота, найденная по калибровочному графику в соответствии с полученной оптической плотностью, мкг/см3; т — навеска пробы, г;

250 — объем минерализата после первого разведения, см';

5 — объем разбавленного минерализата для вторичного разведения, см3;

100 — объем минерализата после вторичного разведения, см3;

I — объем раствора, взятый для проведения цветной реакции, см3;

I06 — множитель для перевода г в мкг;

100 — множитель для перевода в проценты;

6,25 — коэффициент пересчета на белок.

За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений.

Расхождение между параллельными определениями не должно превышать 0,1 % по содержанию азота для мяса и мясопродуктов.

2. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ БЕЛКА ПО КЬЕЛЬДАЛЮ

2.1.    Сущность метода

Метод основан на минерапизации пробы по Кьельдалю, отгонке аммиака в раствор серной кислоты с последующим титрованием исследуемой пробы.

2.1.1.    (Исключен, Изм. № 1).

2.1.2.    Для проведения испытаний применяют реактивы квалификации чистый для анализа (ч. д. а.) и дистиллированную воду или воду эквивалентной чистоты.

2.1.3.    Испытания следует проводить в помещениях, свободных от паров аммиака.

2.2. Метод отбора н подготовки проб

2.2.1    Отбор проб проводят по ГОСТ S756.0—70.

2.2.2    Отобранную пробу двукратно измельчают в мясорубке, перемешивают и помещают, уплотняя, в банку с герметической крышкой.

2.2.3.    Измельченную пробу хранят при температуре не выше 4 “С до окончания испытания.

Срок хранения пробы для испытаний не должен превышать 24 ч.

2.3.    Аппаратура, реактивы и материалы

Весы лабораторные общего назначения 1-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104-88.

Мясорубка бытовая с отверстиями решетки диаметром не более 4 мм по ГОСТ 4025-95 или электромясорубка бытовая по ГОСТ 20469-95.

Колбы Кьельдаля 1-50-14/23 ТС или 1-100-14/23 ТС, 2-50-14 ТХС или 2-100-14 ТХС по ГОСТ 25336-82.

Аппарат для перегонки с водяным паром (Парнаса — Вагнера) или обыкновенная установка для перегонки.

Установка электрическая или газовая для сжигания с регулируемой интенсивностью обогрева-

63

С. 5 ГОСТ 25011-81

ния, позволяющая обогревать колбы Кьельдаля в наклонном положении, таким образом, чтобы зона нагрева находилась ниже уровня жидкости в колбе. Аппарат должен быть оснащен вытяжным устройством, позволяющим удалять испарения кислот во время обогревания.

Мешалка магнитная с регулируемым числом оборотов и штативом, а также захватом для бюретки вместимостью 50 см3.

Гитратор автоматический потенциометрический или полуавтоматическая бюретка.

Бюретка 1-2-50-0.1 или 2-2-50-0,1 по ГОСТ 1770-74.

Дозаторы для жидкостей или цилиндры 1—25, 1—50, 1 — 100. 1—500 по ГОСТ 1770-74.

Мельница шаровая или ступка с пестиком по ГОСТ 9147-80.

Катализатор медный; готовят следующим образом: тщательно смешивают в весовом отношении 30:1 мелкорастертый безводный сульфат калия по ГОСТ 4145-74 с тонко растертым сульфатом меди по ГОСТ 4165-78. Компоненты смеси, взвешенные с погрешностью не более 0,1 г, растирают в шаровой мельнице или в ступке. Смесь хранят в герметически закрытой склянке и предохраняют от увлажнения. Допускается применение других катализаторов.

Кислота серная по ГОСТ 4204-77, 18,76 моль/дм3 (1.84 г/см3).

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77. 8.25 моль/дм3 (330 г/дм3).

Раствор свободный от карбонатов; готовят следующим образом: растворяют 330 г гидроокиси натрия в воде и разба&ляюг до объема I дм5.

Кислота борная по ГОСТ 9656-75, 0,65 моль/дм3 (40 г/дм3); готовят следующим образом: растворяют 40 г борной кислоты в воде и разбавляют до объема 1 дм3.

Кислота соляная по ГОСТ 3118-77 или серная по ГОСТ 4204-77 0,1 моль/дм3 — 0,05 моль/дм3 (0,1 н. — 0,1 и.).

Индикатор Таширо — смесь: готовят растворением 2 г метилового красного и 1 г метилового голубого в 1000 см3 этилового спирта по ГОСТ 5962-671 или по ГОСТ 18300-87, 16.28 моль/дм3 (96 %-ного). Раствор хранят в склянках из темного стекла в холодном темном месте (индикатор изменяет цвет при pH = 5,4).

Бумага пергаментная размерами 60x80 мм по ГОСТ 1341-97.

Средства, предупреждающие перегревание во время минерализации: стеклянные или карборундовые бусы или куски твердого фарфора.

Средства, предупреждающие перегревание жидкостей во время перегонки: карборундовые бусы или с веже выжженные куски пемзы.

Средства, предупреждающие пенообразовапие во время перегонки: парафиновое чистое масло.

Бумажки лакмусовые кислотные или универсальные индикаторы.

Сульфат аммония по ГОСТ 3769-78.

Колба Кн-1-500-29/32 или Кн-2-500-34 по ГОСТ 25336-82.

Стакан Н-1-500 ТХС по ГОСТ 25336-82.

Фильтры обеззоленные.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

2.4. Проведение испытания

2.4.1.    На пергаментной бумаге отвешивают около 2 г пробы с погрешностью не более 0.001 г.

Для проб с большой массовой долей жира масса навески не должна превышать 1,5 г.

2.4.2.    Навеску помещают в колбу Кьельдаля, добааляя несколько стеклянных или карборундовых бус или несколько кусочков фарфора. 15.5 г медного катализатора, взвешенного с погрешностью не более 0,1 г, и не более 25 см3 серной кислоты. Содержимое колбы осторожно перемешивают и колбу укрепляют под углом около 40" относительно вертикали на установке для сжигания. Содержимое колбы обогревают осторожно, до появления пенообразовання и полного растворения пробы.

Затем обогревают интенсивно и выдерживают в состоянии кипения, вращая периодически колбу вокруг ее оси. После полного осветления содержимого колбы продолжают обогрев в течение 90 мин. Общая продолжительность минерализации должна быть не менее 120 мин. Затем содержимое колбы охлаждают до температуры около 40 ‘С, осторожно добавляют 50 см3 волы, перемешивают и охлаждают до комнатной температуры.

Во избежание потерь во время минерализации пробы следует избегать проникновения пены в горло колбы, испытание проводить в условиях, не удлиняющих чрезмерно его продолжительность, но гарантирующих полную минерализацию пробы.

64

1

На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.

ГОСТ 25011-81 С. 6

2.4.3.    Содержимое колбы Кьельдаля подвергают перегонке с водяным паром или простой перегонке, для чего монтируют соответствующую установку.

В стадии перегонки следует соблюдать плотность установки для перегонки, добавлять раствор гидроокиси натрия по стенке колбы Кьельдаля и смешивать оба слоя только после подключения колбы к установке.

В качестве приемника применяют коническую колбу вместимостью 500 см5 (при применении титратора химический стакан вместимостью 500 см3), в которую наливают 50 см3 раствора борной кислоты и 4 капли индикатора Таширо. Колбу помещают под холодильник установки для перегонки таким образом, чтобы нижний конец холодильника был полностью погружен в жидкость.

Для перегонки с водяным паром содержимое колбы Кьельдаля количественно переносят в колбу для перегонки, споласкивая каабу Кьельдаля 50 см3 воды. Затем добавляют 3 капли парафинового масла с целью уменьшения пенообразования, осторожно добавляют 100 см5 раствора гидроокиси натрия таким образом, чтобы в колбе перегонки образовались два слоя жидкости. Немедленно герметизируют аппарат и пропускают водяной пар через содержимое каабы для перегонки. С момента кипения содержимого колбы продолжают обогрев в течение 20 мин. Заканчивают перегонку после получения не менее 150 см3 дистиллята.

Для простой перегонки осторожно разбавляют содержимое колбы Кьельдаля, добавляя 300 см3 воды, перемешивают и охлаждают до комнатной температуры, добавляют несколько карборундовых бус или кусков пемзы и 3 капли парафинового масла. Затем добавляют 100 см3 раствора гидроокиси натрия таким образом, чтобы он образовал отдельный слой на дне колбы Кьельдаля, и немедленно подключают колбы к установке для перегонки. Перегонку заканчивают после получения не менее 150 см3 дистиллята.

2.4.4.    После сбора не менее 150 см3 дистиллята, полученного после перегонки согласно п. 2.4.3, коническую колбу (приемник) опускают таким образом, чтобы нижний копен холодильника находился нал уровнем дистиллята, споласкивают конец холодильника водой и проверяют при помощи лакмусовой бумажки или универсального индикатора изменение окраски конденсата, стекающего из холодильника. При отсутствии изменений окраски перегонку заканчивают.

2.4.5.    Содержимое конической колбы (приемника) титруют раствором соляной или серной кислоты (0.1 моль/дм3 — 0.05 моль/дм3), применяя бюретку, и отмечают с погрешностью не более 0,02 см3 количество израсходованной кислоты.

2.4.6.    При употреблении титратора вместо конических колб как приемника применяют химические стаканы и после окончания перегонки помешают их втитраторе. поступая согласно инструкции по обслуживанию аппарата.

2.4.7.    Полученные результаты титрования используют для вычисления массовой доли общего азота и последующего пересчета на белок.

2.4.8.    Из каждой пробы проводят, по крайней мере, два параллельных определения.

2.4.9.    Контрольную пробу следует проводить так же, как и опытную. Вместо навески мясного продукта берут кусок пергаментной бумаги.

Контрольную пробу (с повторением) следует проводить каждый раз после приготовления свежей порции реагентов или растворов. Рекомендуется также периодическое повторение контрольной пробы при использовании реагентов, которыми уже давно пользуются.

2.4.10.    При получении сомнительных результатов (слишком низких или с большими колебаниями между параллельными испытаниями) необходимо провести проверку установки для перегонки или процедуры минерализации.

Дчя проверки установки для перегонки в аппарат помещают, например, 10 см3 раствора сульфата аммония 0,05 моль/дм’ (0.1 п.), подщелачивают, перегоняют и титруют. Низкий результат (менее 0,95 10-’ моль) может указать на неполную перегонку или неплотность аппарата.

Дчя проверки всего процесса с неорганическим веществом используют сульфат аммония и проводят все испытания, как указано в пп. 2.4.1—2.4.5. Низкий результат, который не может быть приписан процессу перегонки, может быть вызван потерями во время испытаний (выплескивание жидкости, улетучивание соединений азота и т. д.).

Дчя проверки всего процесса с учетом разложения органического вещества определяют массовую долю азота в органическом трудноразлагаемом соединении (например, в триптофане), чистом или смешанном с веществами, не содержащими азот.

Низкий результат может быть получен из-за недостаточного разложения органического вещества (например, вследствие неправильного обогрева или применения несоответствующего катализатора).

65

Сохраните страницу в соцсетях:
Другие документы раздела "Прочие"
РАЗДЕЛЫ САЙТА

НОРМАТИВНЫЕ
ДОКУМЕНТЫ

ПРИСОЕДИНЯЙТЕСЬ