ГОСТ 23058-89

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ стандарт

СОЮЗА ССР

ЖЕЛАТИН-СЫРЬЕ ДЛЯ МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ

ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ

ГОСТ 23058-89

Издание официальное

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО УПРАВЛЕНИЮ КАЧЕСТВОМ ПРОДУКЦИИ И СТАНДАРТАМ Москва

УДК 665.931.7: 004.354    Группа    Н98

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

ЖЕЛАТИН —СЫРЬЕ ДЛЯ МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ Технические условия

Gelatin. Raw material for medical industry Specifications

ОКП 92 1935

Срок действия с 01.07.91 до <11.07.98

Несоблюдение стандарта преследуется по закону

Настоящий стандарт распространяется на желатин, предназначенный в качестве сырья для переработки на предприятиях медицинской промышленности.

I. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1.    Желатин должен быть выработан в соответствии с требованиями настоящего стандарта по технологической инструкинн с соблюдением санитарных правил для предприятий желатиновой промышленности, утвержденных в установленном порядке.

1.2.    М арки

1.2.1.    Б зависимости от назначения желатин вырабатывают ■следующих марок, указанных в табл. 1.

1.2.2.    Коды ОКП приведены в приложении.

С. 2 ГОСТ 23058-89

1.3. Характеристики

1.3.1.    Для выработки желатина применяют:

кость крупного рогатого скота по ГОСТ 16147;

белковые отходы от шкур животных (смесь гольевую консервированную, обрезь спилковую шкур крупного рогатого скота).

1.3.2.    По органолептическим и физико-химическим показателям желатин должен соответствовать требованиям, указанным в табл. 2.

ГОСГ 230М-89 С. 3

Примечания:

J. Нормы по показателям массовой доли золы к дикампческоЯ вязкости указаны в пересчете иа абсмюгао сухой желатин

2,    Нормы по показателям прочности и температуры плавления студня желатина указаны в пересчете на абсолютно сухой беззольный желатин.

3.    Допускается массовая доля частиц желатина размером менее 0.5 мм не более 20%, размером более 5 им - не более 5% от массы партии.

1.3.3. По бактериологическим показателям желатин должен соответствовать требованиям, указанным в табл. 3.

С. 4 ГОСТ 23658-89

1.3.4. Требования безопасности

1.3.4.1.    Желатин относится к трудногорючим веществам. Температура воспламенения желатина —235°С, температура самовоспламенения — 310 °С (тлеет).

1.3.4.2.    Желатин не взрывоопасен. Нижний предел взрываемо-сти аэровзвесн желатина — 162,5 г/м¹.

1.3.4.3.    Помещения, где проводятся работы, связанные с измельчением и пересыпанием желатина, должны быть снабжены местной вытяжной вентиляцией.

1.3.4.4.    При пожаре для тушения следует использовать огнетушители, асбестовую ткань, воду, песок.

1.4.    Маркировка

1.4.1.    Транспортная маркировка — по ГОСТ 14192 с дополнительным нанесением манипуляционного знака «Боится сырости».

1.4.2.    Маркировка, характеризующая продукцию, наносится па транспортную тару несмывающейся непахнущей краской при помощи штампа, трафарета или наклеивания ярлыка с указанием:

наименования предприятия-изготовителя, его подчиненности и (или) товарного знака;

наименования и марки желатина;

номера партии;

массы нетто;

даты выработки;

обозначения настоящего стандарта.

1.5.    Упаковка

1.5.1. Желатин должен быть упакован в бумажные непропи-танные четырехслойные мешки по ГОСТ 2226 с пленочным меш-

ГОСТ ЗМ5Г-09 С к-,

ком-вкладышем по ГОСТ 19360: в пленочные мешки-вкладышн или бумажные непропитанные четырехслойные мешки с последующей укладкой в картонные навивные барабаны по ГОСТ 17065. Полиэтиленовый мешок-вкладыш должен быть заварен, бумажный мешок — зашит машинным способом.

1.5.2. Масса нетто желатина, упакованного в один мешок или барабан, должна быть не более 25 кг.

2 ПРИЕМКА

2.J. Желатин принимают партиями. Под партией понимают любое количество желатина одной марки однородного по своим качественным показателям, оформленного одним документом о качество и предъявленного к одновременной сдаче-приемке

2.2.    Документ о качестве должен содержать: наименование предприятия-изготовителя, его подчиненность и

(или) товарный знак;

наименование и марку желатина: номер партии и дату выработки: количество упаковочных единиц-, массу нетто;

результаты лабораторного анализа; обозначение настоящего стандарта.

2.3.    При массовой доле влаги в желатине менее 16% партию принимают по расчетной массе (т_Р), которую вычисляют по фор-

муле

100-tT.t,

где т_ф — фактическая масса партии желатина, кг;

U7,¹ —фактическая массовая доля влаги в желатине, %;

16 —нормированная массовая доля влаги в желатине, %.

2.4. Объем выборки для контроля качества желатина определяют в соответствии с требованиями табл. 4.

Таблица 4

2*

1

   91    »    150    >

2

»    151    »    280    »

С в ГОСТ 23058-89

2.5.    Массовую долю цинка, свинца, кадмия, меди, мышьяка и ртути предприятие-изготовитель определяет периодически, но не реже одного раза в квартал и по требованию потребителя.

При получении неудовлетворительных результатов испытания переводят в приемо-сдаточные до получения положительного результата ка трех партиях.

2.6.    При получении неудовлетворительных результатов анализа хотя бы по одному из показателей проводят повторный анализ «а удвоенной выборке, взятой от той же партии. Результаты повторного анализа распространяются на всю партию.

3. МЕТОДЫ АНАЛИЗА

3.1.    Отбор и подготовка проб — по ГОСТ 26668, ГОСТ 26669, ГОСТ 11293.

3.2.    Определенно размера частиц желатина проводят по ГОСТ 112S3 со следующим дополнением: используют сетки № 5 и 05.

3.3.    Определение динамической вязкости и падения вязкости проводят по ГОСТ 25183.4 со следующими дополнениями: используют также вискозиметры типа ВГ1ЖТ-2, ВПЖ-4, ВПЖТ-4 (d*al,3I; 1,47). Массу навески желатина (х) в граммах вычисляют по формуле

»оо-\г

где 10 — массовая доля сухого желатина в растворе, %;

V —объем раствора, см³;

е—плотность раствора желатина, принятая равной 1,025 г/см³;

1Г —массовая доля влаги в желатине, %.

Динамическую вязкость <-п) в миллипаскаль-секундах определяют по формуле

r>=k--p,

где k — постоянная вискозиметра, мм^г/с*;

т — время истечения раствора, с;

q — плотность раствора с массовой долей желатина 10%

при (40±0,1)^оС. принимаемая равной 1,025 г/см*.

Вязкость раствора желатина до и после выдержки в термостате при определении падения вязкости оыражают в миллипаскаль-секундах.

3.4. Определение pH раствора проводят по ГОСТ 25183.9 со следующим дополнением: навеску желатина берут без пересчета «а сухое вещество.

ГОСТ 23#5в—М С Т

3.5. Методы бактериологического анализа

3.5.1.    Аппаратура, материалы, реактивы по ГОСТ 11293 со следующим дополнением:

анаэростат;

центрифуга;

мел химически осажденный по ГОСТ 8253; парафин;

бриллиантовый зеленый;

Д-глюкоза по ГОСТ 6038, х. ч.;

молоко коровье пастеризованное по ГОСТ 13277, обезжиренное;

мясо-говядина по ГОСТ 779; мясо-конина по ГОСТ 27095;

желчь крупного рогатого скота свежая, обезвоженная; печень крупного рогатого скота, замороженная поГОСТ 19342; натрий лимоннокислый; плазма крови кролика свежая; натрий серноватистокислый;

натрий фосфорнокислый двузамешенный по ГОСТ 11773; натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный по ГОСТ 245;

натрий кислый селенистокнслый;

параднметиламндобензальдегид;

спирт амиловый;

агар вксмут-сульфигный;

агар бактериологический Плоскирева, сухой;

среда Кода;

цисгсин;

дрожжи хлебопекарные прессованные по ГОСТ 171; магний хлористый по ГОСТ 4209, х. ч,

3.5.2.    Подготовка к анализу

3.5.2.1.    Подготовка и стерилизация посуды, материалов по ГОСТ 11293

3.5.2.2.    Приготовление среды Кесслер (модифицированной)

В I дм³ дистиллированной воды помешают 10 г пептона, 50 см⁵ желчи, кипятят 30 мин, фильтруют через вату, добавляют 2,5 г лактозы и доводят объем дистиллированной водой до первоначального (1 дм³), добавляют 2 см³ водного раствора с массовой долей генциан-виолета 1%. Среду разливают в пробирки с поплавками по 10 см³ и стерилизуют при давлении 5-10« Па в течение 15 мин. Среда имеет фиолетовый цвет.

Допускается замена поплавков клочками стерильной ваты.

3.5.2.3.    Приготовление желчи

Свежую желчь крупного рогатого скота фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Рекомендуется предварительно прогреть-желчь на кипящей водяной бане в течение I ч, затем дают ей от-

С. а. Г9С1 21**3 -I»

стоягься и фильтруют. Фильтрованную горячую желчь разливают по бутылкам и стерилизуют в течение 30 мин при температуре (110±2)°С.

3.5.2.4.    Приготовление среды Мкллеоа

Для приготовления среды Мюллера вначале готовят раствори серноватистокислого натрия и Люголя.

В мерный цилиндр с 50 г серноватистокислого натрия добавляют дистиллированную волу до 100 см³. Полученный раствор стерилизуют текучим паром.

Для приготовления раствора Люголя в 100 см³ дистиллированной воды растворяют 25 г кристаллического йода, 20 г йодистого калия.

Для приготовления среды Мюллера в стерильную колбу помешают 4,5 г химически осажденного мела и стерилизуют сухим паром. наливают 90 см³ мяоо-пептонного бульона, стерилизуют 30 мин при температуре 120 °С, после чего стерильно добавляют 2 см⁵ раствора Люголя и 10 см³ раствора серноватистокнслого «атрия. Среду взбалтывают и разливают в колбы.

3.5.2.5.    Приготовление среды Кауфмана

К 100 см³ стерильной среды Мюллера, приготовленной по п. 3.5.2.4, добавляют I см³ водного раствора с массовой долей бриллиантового зеленого 0,1% и 5 см* стерильной желчи крупного рогатого скота. Смесь хорошо взбалтывают, но не стерилизуют.

3.5.2.6.    Приготовление селенитовой среды

Среду готовят из двух основных расгворов —А и Б.

Раствор А состоит из 5 г пептона чешской фирмы «Спофа» или венгерской фирмы «Рихтер», 7 г безводного двузаметенного фосфорнокислою натрия, 3 г однозамещениого фосфорнокислого натрия, 4 г химически чистой лактозы, 100 см* дистиллированной воды pH 6,9—-7,1. Раствор стерилизуют 30 мни при температуре 112°С.

Раствор Б состоит из раствора с массовой долей кислого селенистокислого натрия 10%, приготовленного на стерильной воде. Раствор готовят непосредственно перед употреблением.

При изменении серии любого из входящих в среду компонентов (пептона, кислого селенистокислого натрия, фосфатов) проводят предварительную подтитровку. При этом экспериментально определяют точную пропорцию фосфорнокислого двузамещенно-го безводного натрия и фосфорнокислого однозамещениого натрия, которая с используемыми образцами пептона и селенистокис-лого натрия даст pH не выше 6,9—7,1, что регулируется изменением соотношения фосфатов. Для приготовления селенитовой среды к 100 см³ раствора А стерильно добавляют 4 cm^j раствора Б. Среду не стерилизуют.

ГОСТ 23Ш-8* С. »

3.5.2.7. Приготовление хлориа в-магниевой среды <М» (модифицированной)

Среда состоит из трех растворов А, В и С.

Для приготовления дрожжевого экстракта в 2 дм⁵ дистиллированной воды растворяют I кг прессованных хлебопекарных дрожжей. Полученную суспензию стерилизуют 30 мин текучим паром, затем отстаивают в холодильнике при температуре (5± I) °С в течение 5—6 сут.

Жидкость над осадком декантируют, приливают 2,5 см³ раствора с массовой долей кристалл-виолета 0,01%, разливают во флаконы или пробирки и вновь стерилизуют при температуре 100 °С в течение 30 мин.

Экстракт хранят в холодильнике при температуре (5±1)^йС в течение двух недель со дня приготовления.

Для приготовления раствора А в 90 см³ дистиллированной воды растворяют 0,42 г пептона, 0,7 г хлористого натрия, 0,15 г од-нозамещенного фосфорнокислого натрия, 2 см³ дрожжевого диализата. (При отсутствии дрожжевого диализата допускается заменять его дрожжевым экстрактом.)

Для приготовления раствора В в 9 см³ дистиллированной воды растворяют 3,6 г кристаллического хлористого магния.

Раствор С состоит из 0,09 см⁴ водного раствора с массовой долей бриллиантового зеленого 5%.

Для приготовления хлористо-магниевой среды «М» (модифицированной) растворы А, В и С смешивают и стерилизуют 30 мин при давлении 5-10* Па.

35.2.8. Приготовление сред Плоскирева. Кода и висмут-суль-фитиого агара (сухие готовые) проводят согласно инструкции, утвержденной в установленном порядке.

3.5.2.9.    Приготовление пептонной воды

К 1 дм^а дистиллированной воды добавляют 10 г пептона и 5 г хлористого натрия, кипятят до растворения пептона, фильтруют, устанавливают pH 7,2—7,4 и стерилизуют 30 мин при температуре 120°С.

3.5.2.10.    Приготовление полужидкого агара

К I дм¹ мясо-пептонного бульона добавляют 0,5 г агара. Среда должна иметь pH 7,0—7,2. Среду стерилизуют 20 мин при температуре 120 °С.

3.5.2.П. Приготовление оеактива Эрлиха

В 50 см* этилового 96’-ного спирта растворяют 4 г парзди-метиламндобензальдегида, затем медленно добавляют 50 см³ концентрированной соляной кислоты. Реактив хранят в склянке из темного стекла при температуре (6±2) °С.

3.5.2.12. Приготовление реактива Ковача

В 75 см³ амилового спирта растворяют 5 г иарадиметиламидо-бензальдегида, затем медленно добавляют 25 см³ концентриро-

С. 10 ГОСТ 23058-89

ванной соляной кислоты. Реактив хранят в склянке из темного стекла при температуре (б ±2) °С.

3.5.2.13.    Приготовление мясной воды, мясо-пептонного бульона. мясо-пептонного агара, питательного агара, карболового раствора генциана фиолетового и кристалл виолета, раствора flic-го.ля, фуксиннасыщенного спиртового раствора, физиологическсг го раствора, среды Хейфеца (модифицированной), основного раствора желатина — по ГОСТ 11293.

3.5.2.14.    Приготовление цитратной плазмы коови, яично-желточно солевого агара или молочно-солевого агара, юхарно-кровяного агара по Цейсслеру, лакмусового молока, сред Вильсон-Ьлера, среды Гисса, среды Кигг-Тароцци -по ГОСТ 10444,1.

3.5.3. Определение коли формных бактерий

Сущность метода заключается в способности колнформных бактерий расщеплять глюкозу и лактозу. При этом в средах Хейфеца и Кода образуются кислые продукты, меняющие цвет индикаторов. а в среде Хейфеца, как и в среде Кесслер, в поплавке образуется газ вследствие расщепления лактозы.

Нель определения этой группы бактерий — проверка соблюдения технологического режима или санитарно-гигиенических условий в процессе производства медицинского желатина.

При микробиологическом контроле продукта в производственных лабораториях можно ограничиваться обнаружением коли-формных бактерий без их биохимической дифференциации.

3.5.3.1. Проведение анализа

В две пробирки, содержащие по 7—9 см³ среды Хейфеца, среды Кода или среды Кесслер, вносят по 1 см³ основного раствора желатина стерильной пипеткой вместимостью 1—2 см³. Посевы помещают в термостат с температурой (37±1)°С на 18—20 ч.

При оосге колнформных бактерий среда Кода окрашивается в желтый цвет, среда Хейфеца —в желтый цвет с образованием газа в поплавке, который может меняться до желто-зеленого цвета, на среде Кесслер в поплавке образуется газ.

Для окончательного заключения о присутствии в продукте колнформных бактерий проводят высев со среды Хейфеса или Кесслер в чашки Петри со средой Эндо или Плоскирева, или Левина. Чашки Петри помещают в термостат с температурой <37± 1) °С. Через 18—20 ч посевы просматривают. На среде Эндо коли форм-ные бактерии образуют темно-красные колонии с металлическим блеском или розово-красные без блеска, на среде Плоскирева — кирпично-красные с глянцевой поверхностью, на среде Левина — темно-фиолетовые колонии или фиолетово-черные блестящие. Из подозреваемых колоний готовят мазки, которые окрашивают по Граму.

Специфическое изменение среды Кода не требует дальнейшего подтверждения.

ГОСТ 23158-89 С. I»

3.5.3.2. Оценка результатов

Обнаружение грамотрицательных палочек, специфически изменяющих цвет жидких дифференциально-диагностических сред и образующих характерные колонии на элективных средах с лактозой, указывает на наличие колиформных бактерий.

3.5.4.    О п р еде л е и и е бактерий группы протея

Сущность метода заключается в специфическом росте бактерий группы протея на скошенном мясо-лептониом агаре.

3.5.4.1.    Проведение анализа

0,5 см³ основного раствора желатина (I : J0) засевают в две пробирки со свежескошенным мясо-пептонным агаром или средой, приготовленной из сухого питательного агара. Раствор желатина вносят з конденсационную воду, не касаясь поверхности агара.

Посевы выдерживают в термостате при (30±1)°С в течение 24—18 ч, после чего их просматривают.

Протей образует тонкий налет, всползающий вверх по поверхности мясо-пептоннсго агара. При обнаружении характерного роста для бактерий группы протея из культуры готовят мазки, окрашивают по Грану и микроскопируют. Бактерии группы протея — палочки, окрашиваются по Граму отрицательно.

3.5.4.2.    Оценка результатов

Наличие на мясо пептонном агаре культуры в виде тонкого налета, всползающего вверх по поверхности среды, и грамотрниа-тельных палочек указывает на бактерии группы протея.

3.5.5.    Определение желатиноразжижающих бактерий

Сущность метода заключается в специфическом росте желати-норазжижаюши.х бактерий на желатине, которые продуцируют к выделяют в среду протеолнтический фермент — желатин азу, расщепляющий белок желатина, вследствие чего отмечается его разжижение.

3.5.5.1.    Проведение анализа

10 см³ основного раствора желатина вносят в две чашки Петри. Желатин распределяют по дну чашек легкими вращательными движениями и выдерживают при (24±1)^СС. Через 48—£6 v чашки с желатином просматривают. Колонии желатнноразжнжа-ющих бактерий имеют вид маленьких прозрачных пузырьков за счет разжижения желатина. При выдерживании чашек с желатином более 4 сут колония увеличивается. При наклоне чашки на месте колонии желатин сползает.

3.5.5.2.    Оценка резулыатов

Обнаруженные на желатине колонии желатиноразжижающих бактерий подсчитывают в каждой чашке Петри (в 1 г продукта) для желатина марки ТК — через 96 ч, для других марок—через 48 ч.

С 12 ГОСТ 2ММ-М

3.5.6. Определение патогенных микроорганизмов

3.5.5.1.    Определение бактерий группы сальмонелл

Сущность метода заключается в определении сальмонелл ка

дифференциально-диагностических средах и дифференциации их от других видов микробов по биохимическим и серологическим свойствам.

3.5.6.1.1.    Проведение анализа

50 см³ основного раствора желатина вносят в 450 см³ одной из сред накопления: селенитового бульона, хлористо-магниевой среды Мюллера, Кауфмана. Колбу тщательно встряхивают и помещают в термостат при (36±1)°С. Через 16—24 ч из среды накопления проводят посев на дифференциальные среды Вильсон* Блера (висмут-сульфитный агар) и Плоскирева. Для этого стерильной пипеткой 0,1—0.2 см^э культуральной жидкости переносят в чашки Петри со средой Плоскирева и 0,5 см³ — на Вильсон* Блера. Затем стерильным шпателем культуральную жидкость распределяют по всей поверхности агара.’ Чашки с посевами перевертывают вниз крышкой и помещают в термостат. Посевы термоста* тируют при (36±1)°С на среде Плоскирева в течение 24 ч, а на среде Вильсон-Блера — 48 ч.

На среде Плоскирева колонии группы сальмонелл бесцветные.

На среде Вилкон-Блера тифозные бактерии растут в виде черных с антрацитовым блеском и с выпуклым центром колоний. Среда под ними окрашивается в черный цвет, паратифозные (А) бактерии растут в виде мелких серовато-зеленых колоний с черным центром, колонии бактерий паратифа (В) и других сальмо* «елл — коричневого цвета с металлическим блеском.

При обнаружении характерных колоний на бактерии группы <альмонелл из небольшой части колонии делают мазок, окрашивают по Граму. Бактерии группы сальмонелл окрашиваются по Граму отрицательно.

При обнаружении в мазках грамотрицательных палочек проводят определение ферментирующих свойств, способности образовывать индол, подвижность клеток, реакцию агглютинации.

Ферментирующую способность определяют в средах Гисса с лактозой, глюкозой, сахарозой и маннитом. Бактерии группы сальмонелл не разлагают лактозу и сахарозу, сбраживают глюкозу и маннит.

Способность образовывать индол определяют на пептон ной веде. Подозрительную на бактерии группы сальмонелл колонию растирают в 0.5—1,0 см³ физиологического раствора. Полученную взвесь засевают на указанную среду и помещают на 24 ч в термостат при (36±1)°С. Затем в пробирку с суточной культурой «сторожно по стенке добавляют пять-десять капель реактива Эрлиха. При наличии индола на границе реактива Эрлиха и куль-

ГОСТ ?ЭМС. 13

туралыюй жидкости через 5 мин образуется ярко-красное кольцо, яри отсутствии — кольцо остается светло-желтого цвета. Бактерии группы сальмонелл не образуют индола.

Для определения индола пользуются также реактивом Ковача. К 24-часовой культуре, выращенной при (36±1)⁰С, добавляют •,2—0,3 см³ реактива и взбалтывают. Результаты учитывают через 10 мин; реактив поднимается на поверхность среды и при наличии индола окрашивается в темно-красный цнет.

Подвижность определяют посевом уколом в полужидкий агар.

Подвижная культура дает сплошной рост, вызывая равномерное помутнение среды, неподвижные культуры образуют рост только по ходу иглы. Бактерии группы сальмонелл в большинстве подвижны.

Если выделенная культура грамотрииатвльная, не разлагает лактозу и сахарозу, не образует индол и подвижка, то она подозрительная на сальмонеллы к с ней проводят серологический анализ путем постанови» «реакции агглютинации на горедметном стекле с 'агглютинирующей адсорбированной поливалентной сальмо-неллезной 0-сывороткой.

Получение положительной реакции на стекле с поливалентной сывороткой дает основание отнести анализируемую культуру к роду сальмонелл.

3.5.6.1.2.    Оценка результатов

Наличие в большинстве подвижных, грамотрицательных палочек, не расщепляющих лактозу и сахарозу, разлагающих глюкозу с образованием кислоты и газа, маннит— с образованием кислоты. не образующих индола, обладающих положительной реакцией агглютинации с поливалентной сывороткой, указывает на бактерии рода сальмонелл.

3.5.62. Определение стафилококков

Сущность метода заключается в характерном росте стафилококков на элективной среде.

3.5.6.2.J.    Прсведение анализа

0,3 см* основного раствора желатина (1 :10) наносят на поверхность яично-желточно-солевого агара или молочно-солевого агара в две чашки Петри, равномерно растирают, и чашки со средой термостатируют в течение 48 ч при (37=*: 1) °С.

На поверхности питательной среды колонии стафилококков имеют вид плоских, блестящих, эмалево-белых или золотистых колоний с ровными краями. Из подозрительных колоний готовят препараты, которые окрашивают по Граму. При наличии стафилококков в препарате обнаруживаются грамположнтельные кокки, располагающиеся неправильными гроздьями. Определение патогенности у выделенных штаммов стафилококков проводят с помощью реакции плазмокоагуляцин.

С. 14 ГОСТ 23058-39

В реакции плазмокоагуляции используют плазму свежеполу-ченной крови кролика. 8 см³ свежеполученной крови кролика смешивают с 2 см' раствора с массовой долей лимоннокислого натрия 5%. Смесь центрифугируют или оставляют на холоде, полученную плазму отсасывают.

Для постановки реакции плазмокоагуляции в стерильную пробирку наливают 0,2—0,3 см³ плазмы, разведенной в соотношении (] : 3) — (1 : 5) стерильным физиологическим раствором. Агаровую культуру стафилококка вносят в плазму петлей, тщательно размешивают. Пробирки выдерживают при 37°С в течение суток, просматривают их через 3—6 и 18—24 ч. Штаммы стафилококков, продуцирующие фермент плазмокоагулазу, вызывают свертывание плазмы, вследствие чего она превращается в желеобразную массу, не выливающуюся при перевертывании пробирки. Свертывание плазмы обозначается знаком плюс ( + ).

3.5.5.2.2. Оценка результатов

Наличие грамположнтельных, расположенных гроздьями, кокков. способных коагулировать плазму крови кролика, указывает на патогенные стафилококки.

3.5.6.3. Определение патогенных спорообразующих аэробов

Сущность метода заключается в определении и Вас. cereus биологической пробой на мышах. Вас. anthracis.

3.56.3.1. Проведение анализа

Для выявления в желатине Вас. anthracis и Вас. cereus по I см³ основного раствора желатина вносят в две пробирки с 1%-ным мясо-пептонным бульоном с глюкозой.

Посевы термостатируют при {36±1)°С в течение б сут, ежедневно наблюдая за их состоянием. При обнаружении в посевах признаков роста микроорганизмов (появление осадка, помутнение среды, газообразование) посевы микроскопируют. Мазки готовят не позже чем через 18 ч после появления в пробирке видимого роста и окрашивают по Граму. В конце 5 сут посевы также микроскопируют. При обнаружении в мазках аэробных гра«положительных палочек культуру проверяют на патогенность путем биологической пробы на белых мышах. Для этого после 5 сут культивирования микрофлору из каждой пробирки с мясо-пептонным бульоном пересевают в свежеприготовленный мясо-пептониый бульон. Посевы выдерживают 12 ч при (36±1)°С. Полученную культуру в количестве 0.25 см³ вводят белым мышам внутрибрюшшшо. При наличии в культуре патогенных штаммов Вас. ccreus у мишки спустя 1 ч после инъекции появляются признаки заболевания. После короткого периода возбужденного состояния животные становятся очень спокойными, перестают двигаться, дыхание становится затрудненным. Иногда умеренная судорога. Смерть наступает чаще всего через 3—6 ч после инъекции, иногда в пределах первых 21 ч. В месте инъекции на коже может образоваться язва.

ГОСГ 23058-8» С, |5

Если смерть зараженного животного наступает через 2 и более суток, то причиной ее может быть Вас. anthracis или ложносиби-роязвенные бактерии. Зараженных животных держат под наблюдением в течение 10 сут. Гибель мышей свидетельствует о патогенности выделенной микрофлоры.

3.5.6.3.2. Оценка результатов

При постановке биологической пробы на мышах, последние погибают через двое и более суток, что указывает на наличие в желатине Вас. anthracis.

Если мыши погибают через 3—6 нлн 24 ч, это указывает на наличие в желатине Вас. cereus.

3.5.6.4.    Определение Cl. perfringens

Сущность метода заключается в специфическом росте С1. рег-frlngens на специальных питательных средах.

3.5.6.4.].    Проведение анализа

Ilo 1 см³ основного раствора желатина (1 : 10) высевают в две пробирки со средой Кигг-Та)роцци. Перед посевом среду прогревают на кипящей водяной бане 20 мин для удаления кислорода. Одну из засеянных пробирок также прогревают при 80 °С на водяной бане для уничтожения аэробной микрофлоры. Посевы помещают на 5 сут в термостат с температурой 37°С. За появлением роста микроорганизмов наблюдают ежедневно. Cl. perfringens в среде начинается с появлением равномерной мути по всей толще столбика, отступая от его поверхности на (0,5—1,0) см. Прорастание спор и деление клеток сопровождается выделением газа. Среда при развитии в ней Cl. perfringens дает сырный запах. Муть в среде постепенно исчезает, культура остается на дне в виде небольшого осадка. В мазках, приготовленных из 13—24 часовой культуры, наблюдаются грамположительные палочки. В мазках, приготовленных из осадка, наблюдаются толстые палочки с закругленными концами со спорами, расположенными группами параллельно друг другу по две, одиночно или цепочкой.

Подвижность клеток определяют при микроскопировании в раздавленной капле. Клетки Cl. perfringens неподвижны.

При обнаружении в среде Китт-Тароции характерных для Cl. perfringens палочек проводят посев в лакмусовое молоко с цистеином, среду Вильсон-Блера и на кровяной агап. Посевы помещают на 18—24 ч в термостат с температурой 37°С.

Посев на среду Вильсон-Блера проводят следующим образом: среду расплавляют и охлаждают до 45°С. Посев проводят пастеровской пипеткой вглубь так. чтобы в среду не попали пузырьки воздуха.

Посевы на чашках Петри с кровяным агаром (по Цейсслеру) выдерживают в анаэростате при 37°С.

При отсутствии анаэростатов можно использовать чашечный метод или метод Внньяля-Вейона.

L\ Iв Г«СТ 230S8—8S

При использовании чашечного метода в среду, ггрнгоговлепнуго по Цейсслеру, вносят 0,5 см⁵ анализируемого материала. Срелу осторожно взбалтывают без образования пены и наливают в крышку стерильной чашки Петри, после чего на почти застывший агар помещают вторую половину чашки Петри так, чтобы ее дно плотно соприкасалось с поверхностью залитого агара. Края чашки заливают парафином или замазывают пластилином. Чашки помешают на 24—48 ч в термостат гари 37°С. Выросшие колонии рассматривают с помощью лупы.

При использовании метода Виньяля-Вейона засеянный материал набирают в стеклянную трубку (пастеровская пипетка длиной ‘20 см и диаметром 0,75 см), один конец которой закрыт ватой, а другой оттянут. Среду набирают не более чем на ³/₄ длины трубки, после этого оттянутый конец трубки запаивают. Трубки со средой помещают в термостат при 37°С. Через 2-6 сут посевы з трубках просматривают и отмечают рост отдельных колоний. При наличии газа столбик агара разрывается.

По истечении срока термостатирования учитывают результаты роста:

в пробирках с лакмусовым молоком Cl. perfringens бурно ферментирует молоко с образованием губчатого сгустка красноватосиреневого цвета в верхней части пробирки, при этом сыворот-ка становится прозрачной;

на среде Вильсон-Блера через 18 ч отмечается образование в глубь агара черных колоний, разрывающих среду вследствие газообразования.

3.5.6.4.2. Оценка результатов

Наличие неподвижных грамположнтельных палочек, вызывающих бурную ферментацию молока с образованием губчатого сгустка красновато сиреневого цвета, черных колоний на среде Вильсон-Блера указывает на присутствие Cl. perfringens о желатине.

3.5.6.5. Определение Cl. boiulinum

Сущность метода заключается в обнаружении Cl.botulinum по характерному росту на специальной среде и определении боту-линических токсинов иа мышах.

З.5.6.5.1. Проведение анализа

По I см³ основного раствора желатина высевают в две пробирки со средой Китг-Тароцци. Перед посевом среду прогревают в течение 20 мин на кипящей водяной бане. После посева одну из пробирок прогревают в течение 20 мин при 80 °С для уничтожения вегетативной микрофлоры. Посевы помещают на 7 сут в термостат при 37^СС. За ростом бактерий наблюдают ежедневно.

Если возбудители ботулизма находятся в вегетативной форме, то будет наблюдаться рост в непрогретой пробирке. При наличии

ГОСТ 23*58—SI С. 17

споровых форм рост будет наблюдаться как в прогретой пробир-. ке, гак и в непрогрегой.

Рост Cl. botulinum характеризуется газообразованием и помути нением среды.

Для приготовления мазков пастеровской пипеткой бер>т культуру со дна пробирки. Мазки окрашивают по Граму и микроско-пируют. Возбудитель ботулизма имеет вид лалочек с закругленными концами различной длины и ширины в зависимости от типа» часто — коротких цепочек. Клетки со спорой имеют вид ракетки, отделившиеся споры — овальные. Клетки в молодом возрасте грамположнтельные. При старении культуры (через четверо и более суток) появляются грамотрнцательные палочки.

При наличия в мазках характерных палочек и спор для боту-линуса проводят биологическую пробу. Для этого стерильной пипеткой отсасывают культуральную жидкость так, чтобы вазелиновое масло осталось н пробирке. Культуральную жидкость центрифугируют с частотой вращения 3000 об/мин ¹ в течение 20 мин. С полученной надосадочной жидкостью ставят биологическую про-бу на мышах.

Анализ на ботулиннческий токсин проводят следующим образом. Вначале ставят реакцию нейтрализации со смесью противо-ботулнннческих сывороток. Смешивают равные объемы моновалентных сывороток типов А. В. С, Е. F и 0,6 см* полученной смеси добавляют в пробирку к 2.4 см¹¹ исследуемого центрифугата, В другую (контрольную) пробирку к 2,4 см* исследуемого центрифугата добавляют 0,6 см³ физиологического раствора. Содержимое пробирок перемешивают и выдерживают в течение 30 мин при (21±3)°С. Для биологической пробы анализируемый ценгри-фугат вначале отбирают нз контрольной, а затем из" опытной пробирки по 1 см* и вводят двум белым мышам массой по 16—18 г каждая.

Остаток центрифугата сохраняют в холодильнике для дальнейших исследований.

Наблюдение за животными ведут на протяжении 2, 4, 6, 24 ч в течение 4 суток.

При наличии ботулнннческого токсина две контрольные мыши, которым вводился не смешанный с сывороткой центрнфугат, болеют, а иногда гибнут; у мышей, которым вводили смешанный с сывороткой центрнфугат, признаков заболевания ботулизмом не наблюдается.

Если в центрнфугате обнаружен ботулиннческий токсин, то для определения типа токсина ставят развернутую реакцию нейтрализации с моновалентными типоспецнфнческимн антитоксическими диагностическими сыворотками.

Для этого в шесть пробирок разливают по 2,4 см³ фильтрата, затем в пять пробирок добавляют по 0,6 см³ сыворотки типов А,

С. IS ГОСТ 230W-8t

В, С, Е, F, а в шестую контрольную пробирку добавляют 0,6 см¹ физиологического раствора. Приготовленную смесь выдерживают в течение 30 мин при (21 ±3) или 37°С, после чего вводят по 1 см* каждой смеси внутрибрюшинно двум мышам. Для взятия пробы из каждой пробирки используют чистый шприц. Результат учитывают в течение 4 сут через 4—6 ч, затем через 24 ч. Выживают мыши, получившие смесь токсина и гомологической сыворотки, остальные мыши погибают.

Типовую принадлежность определяют по типам сывороток, нейтрализующих токсин.

3.5.6.5.2. Оценка результатов

Наличие палочек, типичных по морфологии для Cl. botulinum и ботулинического токсина указывает на присутствие возбудителя ботулизма.

4. ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ

4.1.    Транспортированне

4.1.1.    Желатин транспортируют всеми видами транспорта в крытых транспортных средствах в соответствии с правилами перевозок грузов, действующими на транспорте данного вида.

4.1.2.    В пакетированном виде транспортируют по ГОСТ 21929. Пакеты укладывают на поддоны по ГОСТ 9557 или ГОСТ 9078. Средства скрепления грузов в транспортные пакеты по ГОСТ 21650. Размеры и параметры пакетов должны соответствовать требованиям ГОСТ 24597.

4.1.3.    Желатин транспортируют в универсальных контейнерах по ГОСТ 18477.

4.2. Хранение

Желатин должен храниться п сухом закрытом помещении при температуре не выше 25 °С и относительной влажности воздуха не более 70%. Желатин нельзя хранить вместе с химикалиями, особенно с формалином, сульфитами, сульфидами, аммиаком, кислотами, а также с веществами с высокой гигроскопичностью и сильным запахом.

5. ГАРАНТИИ ИЗГОТОВИТЕЛЯ

5.1.    Изготовитель гарантирует соответствие желатина требованиям настоящего стандарта при соблюдении условий трашепор' тирования и хранения.

5.2.    Гарантийный срок хранения желатина марок ТК, МК и Ж —один год с даты выработки.

ГОСТ 23058-80 С 1»

ПРИЛОЖЕНИЕ

Обязательное

С 20 ГОСТ 23058-89

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1.    РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Государственным агропромышлен» ным комитетом СССР

РАЗРАБОТЧИКИ

В. А. Тукмачев, канд. хим. наук (руководитель темы); В. К. Чупрасов, канд. техн. наук; JI. И. Стасевич; Т. X. Чу-рукба; М. М. Павликова; А. Н. Гусева; Н. А. Строкова

2.    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 26.12.89 № 4152

3.    Срок первой проверки — 1994 г.

Периодичность проверки — 5 лет

4.    ВЗАМЕН ГОСТ 23058-78, ТУ 49 1208—85, ТУ 49 1218-85

5.    ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Г09Г >ЗМв-11 С ?1

Ре да пор Т. И. Василенко Технический редактор Л. А. Кузнецом Корректор В. С. Черная

Сдано в иаб. ЛОГ.SO Поди. ■ веч М.М.90 1,5 уел. ве«. ж 1.8 гсл. кр.-отт. 1.35 уч.-юд. «. Твраж 6000    Ц«па    30    ж.

Орден* «Ззак Почет»» ИитоспФ стандарте*. 133*57, Молвя. ГСП, Ho»osp«ce<(i«Mi wp.,* 7*п. «Московские веигим». Мосыа. Лилии вер., в. За«. 1571